O Apple stem pitting virus (ASPV) foi detectado por RT-PCR em amostras de cultivares de pereiras européias (Pyrus communis L.) cvs. Starkrimson e Abate Fetel, e asiáticas (P. pyrifolia var. culta) cvs. Kousui e Housui coletadas no início do outono de 2003 em pomar da Estação Experimental da Embrapa Uva e Vinho, Vacaria, RS. Utilizando várias combinações de oligonucleotídeos, foram amplificados fragmentos de DNA de 269 e 1554 pb, este último contendo o gene completo (1131 nt) da proteína capsidial do ASPV. Outro fragmento amplificado de 291 pb compreende parte do gene da polimerase viral. Estes fragmentos constituem-se em um excelente instrumento de diagnóstico do ASPV em pereiras. A comparação das seqüências de nucleotídeos do gene da proteína capsidial do ASPV com seqüências do banco de dados GenBank, revelou identidades de 89% com seqüências de um isolado alemão de macieira e de 85 a 88% com isolados poloneses, de pereiras. A indicadora herbácea Nicotiana occidentalis cv. 37B, inoculada mecanicamente com extrato foliar da cv. Housui, apresentou lesões locais necróticas, necrose foliar marginal e das nervuras. O ASPV também foi detectado por dot-ELISA nas cvs. Abate Fetel e Kousui, na cv. Starkrimson por imunoblot, e em Pyronia veitchii (Trabut) Guill. por enxertia de borbulhas da cv. Abate Fetel infetada.

Apple stem pitting virus (ASPV) was detected in samples of European pear (Pyrus communis) cvs. Starkrimson and Abate Fetel, and Asian pear (P. pyrifolia var. culta) cvs. Kousui and Housui. The samples were collected in the beginning of autumn 2003 at the Experimental Station of Embrapa Uva e Vinho, Vacaria, RS. Using several combinations of primers, DNA fragments of 269 and 1554 bp were amplified, the latter containing the complete coat protein gene (1131 nt) of ASPV. Another amplified fragment of 291 bp comprised part of the viral polymerase gene. These fragments are excellent tools for the diagnosis of ASPV in pear. Comparison of the nucleotide sequences with sequences of the GenBank showed 89% identity with sequences from the German isolate of apple, and 85 to 88% with Polish isolates, both from pear. The herbaceous indicator Nicotiana occidentalis cv. 37B, mechanically inoculated with leaf extracts from cv. Housui, presented necrotic local lesions, marginal leaf necrosis and severe vein necrosis. ASPV was also detected by dot-ELISA in the cvs. Abate Fetel and Kousui, by imunoblot in the cv. Starkrimson and by indexing on Pyronia veitchii, graft-inoculated with buds of the infected cv. Abate Fetel.

O Grapevine virus A (GVA) está associado à "Acanaladura do lenho de Kober", uma doença do complexo rugoso da videira (Vitis spp.). Neste trabalho, um isolado brasileiro de GVA (GVA-RS) foi caracterizado biologicamente por transmissão mecânica para cinco hospedeiras herbáceas e por enxertia na videira indicadora cv. Kober 5BB, e também por sorologia. O RNA total foi extraído de videira infetada cv. Pirovano 65. Para a RT-PCR, dois pares de oligonucleotídeos foram utilizados. Dois fragmentos de DNA, 430 e 451 pb, apresentando sobreposição parcial de nucleotídeos, foram amplificados por PCR. A seqüência do gene da proteína capsidial do GVA-RS com 597 nucleotídeos e 198 aminoácidos deduzidos, com massa molecular calculada de 21,6 kDa, foi alinhada a outros isolados virais. As seqüências de nucleotídeos e aminoácidos deduzidos do GVA-RS apresentaram maior identidade, 91,4% e 95,4%, respectivamente, com um isolado italiano. O GVA-RS apresentou expressiva divergência dos Vitivirus Heracleum latent virus (HLV), Grapevine virus B (GVB) e Grapevine virus D (GVD), com identidade de nucleotídeos variando de 76% a 83,1%.

The Grapevine virus A (GVA) is associated with the Kober stem grooving disease, which is part of the grapevine (Vitis spp.) rugose wood complex. In this work, a Brazilian isolate of GVA (GVA-RS) was characterized biologically by mechanical transmission to five herbaceous hosts, by grafting on Kober 5BB grapevine indicator and by serology. Total RNA was extracted from infected grapevine cv Pirovano 65. For a reverse transcribed polymerase chain reaction, two sets of primers were used, resulting in two partially overlapping DNA fragments of 430 and 451 base pairs. The coat protein gene sequence of GVA-RS with 597 nucleotides and 198 deduced amino acids with a predicted Mr of 21.6 kDa, was aligned with those of other viral isolates. The nucleotide and the amino acid sequences of GVA-RS were closest in identity to an Italian isolate, 91.4% and 95.4%, respectively. The GVA-RS exhibited a strong divergence to the vitiviruses Vitivirus Heracleum latent virus (HLV), Grapevine virus B (GVB) and Grapevine virus D (GVD), displaying nucleotide identity of 76% - 83.1%.

Um isolado de Grapevine virus B (GVB), obtido por indexação de Vitis labrusca e V. vinifera na indicadora LN33, foi transmitido mecanicamente para várias espécies do gênero Nicotiana. O vírus foi parcialmente purificado de N. cavicola e a proteína capsídica foi estimada em 23 kDa por SDS-PAGE. Ao microscópio eletrônico, observou-se, em extrato foliar de N. occidentalis e N. cavicola, partículas flexuosas com estriações transversais, predominantemente medindo 750-770 x 12 nm, com comprimento modal de 760 nm. A decoração das partículas indicou reação clara e positiva com anti-soro contra GVB. Em DAS-ELISA, GVB foi detectado em extratos de Nicotiana spp. e de videira (Vitis spp.). Em Western blots foram observadas reações específicas e cruzadas, da proteína capsídica de GVB com os anti-soros contra GVB e GVA, respectivamente. A partir do RNA viral extraído de N. occidentalis, foi amplificado por RT-PCR um fragmento de 594 bp específico de GVB, que codificou 197 aminoácidos do gene da proteína capsídica. As seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos deduzidos do gene da proteína capsidial apresentaram alta identidade com isolados italianos e japoneses de GVB.

An isolate of Grapevine virus B (GVB), obtained by indexing Vitis labrusca and V. vinifera grapevines on the indicator LN33, was transmitted mechanically to several Nicotiana species. The virus was partially purified from N. cavicola and the coat protein estimated at 23 kDa by SDS-PAGE. In negatively stained leaf extracts of experimentally inoculated N. cavicola and N. occidentalis, flexuous particles with cross banding were observed, predominantly measuring 750-770 x 12 nm, with a modal length of 760 nm. Decoration indicated a clear, positive reaction against AS-GVB. In DAS-ELISA, GVB was detected in N. cavicola and grapevine extracts, and Western blots showed homologous and cross reaction of GVB and GVA antisera with GVB coat protein. Using specific primers for GVB, a fragment of 594 bp, comprising the coat protein gene coding for 197 amino acids, was amplified by RT-PCR with viral RNA extracted from GVB-infected N. occidentalis. The nucleotide and the deduced amino acid sequences of the coat protein gene showed high identities with Italian and Japanese isolates of GVB.

Infecções virais em alho são normalmente causadas por um complexo viral. Neste estudo, um complexo viral de alho, coletado em campo, foi purificado. Procedeu-se à amplificação por RT-PCR usando oligonucleotídeos desenhados para regiões-consenso dos genes das proteínas capsidiais de Onion yellow dwarf virus, estirpe do alho e de Leek yellow stripe virus. cDNA de Garlic common latent virus foi sintetizado usando oligo-dT e oligonucleotídeos aleatórios. Por estes procedimentos clones de diferentes espécies virais foram isolados e sequenciados. A análise das sequências nucleotídicas e os resultados sorológicos revelaram a presença dos Potyvirus OYDV-G e LYSV e do Carlavirus GCLV, simultaneamente infetando plantas de alho. As seqüências de aminoácidos deduzidos dos isolados brasileiros foram comparadas com aquelas de vírus relacionados, relatados em diferentes regiões do mundo. A análise mostrou pequena variabilidade em relação aos isolados brasileiros de OYDV-G e GCLV, e maior divergência em relação ao isolado de LYSV. A detecção destas espécies virais também foi obtida por reações específicas observadas quando o gene da proteína capsídica dos isolados brasileiros foi usado como sonda em ensaios de hibridização do tipo dot-blot e Southern blot. Em campo, a re-infecção natural de alho livre de vírus foi avaliada.

Garlic viruses often occur in complex infections in nature. In this study, a garlic virus complex, collected in fields in Brazil, was purified. RT-PCR was performed using specific primers designed from the consensus regions of the coat protein genes of Onion yellow dwarf virus, a garlic strain (OYDV-G) and Leek yellow stripe virus (LYSV). cDNA of Garlic common latent virus (GCLV) was synthesized using oligo-dT and random primers. By these procedures individual garlic virus genomes were isolated and sequenced. The nucleotide sequence analysis associated with serological data reveals the presence of two Potyvirus OYDV-G and LYSV, and GCLV, a Carlavirus, simultaneously infecting garlic plants. Deduced amino acid sequences of the Brazilian isolates were compared with related viruses reported in different geographical regions of the world. The analysis showed closed relations considering the Brazilian isolates of OYDV-G and GCLV, and large divergence considering LYSV isolate. The detection of these virus species was confirmed by specific reactions observed when coat protein genes of the Brazilian isolates were used as probes in dot-blot and Southern blot hybridization assays. In field natural viral re-infection of virus-free garlic was evaluated.